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PCR實驗方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對表達量。

特點優(yōu)勢：
1. 特異性：詹姆士城峽谷病毒PCR檢測試劑盒供應(yīng)使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

人肺轉(zhuǎn)化細胞;AE1201Dipxenylcarbazone二本基卡巴腙25克CP，13.5-15.5%

猞猁皮膚成纖維樣細胞;ELS1 大鼠腎細胞，NRK細胞 NBTF細胞，新生牛眼Tenon's囊成纖維細胞還原型輔酶Ⅰ二內(nèi)鹽(+4°C) bqtc-Nicotincmidq cdqninq dinuclqotidq diwo7ium sclt 606-68-8

人羊膜細胞;WISH苔酚 Orcinol monohydrate (≥99%, from liche... 6153-39-5 5G 染色劑

HA Others H12N5 甲型 H12N5 (A/green-winged teal/ALB/199/1991) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) Coronene六本并本1克CP

SF9, 昆蟲卵巢細胞L-OrnithineHCl 10g/25g/50g/100g 國產(chǎn)
MDA-MB-231(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2 大鼠 PD-L1 / B7-H1 / CD274 人細胞裂解液 (陽性對照) 噻托溴銨一水合物Tiotropium bromide hydrate 質(zhì)量規(guī)格：度>99%

豚鼠胚胎細胞;104C1鹽酸胺酮Amiodarone HCl質(zhì)量規(guī)格：purity>99.5%,EP6,BR

CALR Others Human 人 CALR / Calreticulin 人細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸胺酮（標準品）Amiodarone HCl質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品

腦成纖維細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)阿莫曲普坦蘋果酸鹽Amotriptan malate質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR

Ramos細胞，血細胞瘤細胞系 615小鼠前瘤株,Fc細胞 人成纖維細胞-心房裂解物HCF-aa L阿糖腺苷Vidarabine/Ara-A質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR,可用于細胞培養(yǎng)
詹姆士城峽谷病毒PCR檢測試劑盒供應(yīng)PLAUR Others Mouse 小鼠 uPAR / PLAUR / CD87 人細胞裂解液 (陽性對照) 雙乙酸鈉 diacetate質(zhì)量規(guī)格：>99%

管內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)L-甘-谷二肽,甘氨酰-L-谷氨酰胺一水合物Glycyl-L-glutamine monohydrate質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

BTC Others Cynomolgus 食蟹猴 BTC / Betacellulin 人細胞裂解液 (陽性對照) 6-羥基多沙唑嗪6-Hydroxy Doxazosin質(zhì)量規(guī)格：美國進口

小鼠胚胎成纖維細胞;3T3-Swiss albino7-羥基多沙唑嗪7-Hydroxy Doxazosin質(zhì)量規(guī)格：美國進口

16HBE細胞，人上皮細胞 化學(xué)轉(zhuǎn)化小鼠鼻咽上皮細胞,TMNE細胞 CL-0178OVCAR-3(人細胞)5×106cells/瓶×2恩替卡韋 Labeled d2, 15N, 13CEntecavir Labeled d2, 15N, 13C質(zhì)量規(guī)格：美國進口
人胚腎二倍體細胞;HEK-2 人直腸平滑肌細胞完全培養(yǎng)基 100mLNADTRIHYDRATE氧化型輔酶Ⅰ試劑級米白色凍干粉FROZENsigma

人腎系膜細胞RNAHRMC miRNA5 μg4,4’-二羌基二本同 4,4'-Dixy7noxybqnzophqnonq 611-99-4

ADK Others Human 人 ADK 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) SCCRAM肉湯250克RT

水貂肺上皮細胞;Mv.1.Lu(NBL-7)4-metxYLUMBELLIFERYLPHOSPHATE4-甲基傘花基嶙酸鈉三水 (MUP)超級白色至灰白色粉末FROZENsigma

SHG-44細胞，細胞 NCTC克隆929細胞,L129細胞 人T瘤細胞Jurkat亞系;Jurkat77(福林酚)
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個堿基，應(yīng)嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。