亞洲柑桔黃龍病菌PCR試劑盒反應(yīng)五要素：

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：

①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

 巨大芽孢桿菌
 腐敗希瓦氏菌
 開菲爾乳桿菌
 渾濁紅球菌
 香茅醇假單胞菌
 解肝磷脂土地桿菌
 紅平紅球菌
 土生拉烏爾菌（土生克雷伯菌）
 解藻弧菌（溶藻弧菌）
 洋蔥伯克霍爾德氏菌
 霍亂弧菌
 日勾維腸桿菌
 施氏假單胞菌
 表皮葡萄球菌
 拜氏梭菌
 馬鏈球菌獸疫亞種
 壞死梭桿菌壞死亞種
 泛養(yǎng)副球菌
 解淀粉芽孢桿菌
 乳酸片球菌
 戊糖片球菌
 朝鮮芽孢八疊球菌
 宋氏志賀氏菌
 木醋桿菌
 明亮發(fā)光桿菌
 空腸彎曲桿菌
 嗜酸乳桿菌
 干酪乳桿菌
  耐鹽芽孢桿菌
 無乳鏈球菌
 德氏乳桿菌乳酸亞種（萊氏曼氏乳桿菌）
 斯氏李斯特氏菌
 側(cè)孢短芽孢桿菌
 乳酸乳球菌乳亞種
 牙齦卟啉單胞菌